I. Selección de cuadrícula
El recuento de sedimentos de orina generalmente utiliza cuatro cuadrículas de esquina grandes o una cuadrícula central grande (ajustada de acuerdo con la cantidad de células/cilindro: cuatro cuadrículas de esquina para una gran cantidad de células, una cuadrícula central grande para una pequeña cantidad de células).
Preparación de muestras y procesamiento previo al recuento
Colección de especímenes:
Generalmente se recolecta orina fresca de la mañana (alta concentración, alta tasa positiva) u orina aleatoria, con 10 ml de orina en un tubo de centrífuga.
Concentración por centrifugación: Centrifugar a 1500 rpm durante 5 minutos según los procedimientos operativos estándar.
Descarte el sobrenadante: deseche con cuidado el sobrenadante, conservando los últimos 0,2 ml de sedimento (concentración 50 veces mayor, factor de concentración = volumen de orina original / volumen de sedimento = 10/0,2 = 50).
Resuspender el sedimento: agite suavemente el tubo de centrífuga para dispersar uniformemente el sedimento y evitar la agregación celular.
Procedimiento de conteo: Adición de muestra: Use una micropipeta para extraer el sedimento de orina mezclado y agréguelo al borde del cubreobjetos en la cámara de conteo (usando la acción capilar para llenar la cámara de conteo), evitando burbujas de aire (las burbujas de aire causarán un volumen inexacto en el área de conteo).
Sedimentación: Coloque la cámara de conteo sobre la platina y déjela reposar durante 1-2 minutos para permitir que los elementos formados se asienten en el fondo de la cámara de conteo, evitando errores causados por células flotantes durante el conteo.
Observación microscópica: utilice un microscopio con aumento bajo (10×) para ubicar la cámara de conteo, luego utilice un aumento alto (40×) para realizar el conteo.
Principios de conteo: Siga el principio de "contar la parte superior pero no la inferior, contar la izquierda pero no la derecha" (cuente solo las células en los lados adyacentes y en las esquinas de las líneas) para evitar duplicaciones u omisiones. Selección del área de conteo: Para componentes con una gran cantidad de glóbulos rojos, glóbulos blancos, etc.: Cuente todos los componentes objetivo en los cuatro cuadrados de las esquinas.
Para componentes con una pequeña cantidad de moldes, etc.: cuente todos los componentes objetivo en los nueve cuadrados grandes de la cámara de conteo.
Método de cálculo del núcleo: recuento de sedimentos urinarios
El cálculo convierte la cantidad real dentro del área de recuento en la concentración original de componentes en la orina. La fórmula requiere considerar el volumen del área de recuento y el factor de concentración de la muestra.
Fórmula de cálculo general:
Ejemplo de cálculo específico (contando 4 celdas de esquina como ejemplo):
Concentración de componentes de la orina (células/μL) = (Número total de recuentos × Factor de concentración) / Volumen total del área de recuento (μL)
1. Determinar parámetros:
Área de conteo: 4 células grandes, cada volumen de célula grande = 0,1 μL, por lo tanto, el volumen total de 4 células grandes = 4 × 0,1 = 0,4 μL.
Factor de concentración: Después de centrifugar 10 mL de orina, se retienen 0,2 mL de sedimento, factor de concentración = 10/0,2 = 50.
Recuento real: suponga que se cuentan un total de 80 glóbulos blancos en las 4 celdas de las esquinas.
Concentración de glóbulos blancos (células/μL) = 80 × 50 / 0,4 = 10000 células/μL
Caso de recuento de células más pequeñas (conteo de 9 células grandes)
Si se cuentan 9 células grandes (por ejemplo, recuento de yeso), entonces "volumen total del área de recuento = 9 × 0,1 = 0,9 μL", los demás parámetros permanecen sin cambios y se puede aplicar la fórmula.
Nueve zonas de conteo (cada una con un volumen de líquido de 0,1 μL), cada una de 3 mm x 3 mm y una profundidad de 100 μm. El ancho de la línea de la cuadrícula es de 15 μm (±1 μm).